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COVID-19

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LeviCell™

肺泡II型细胞简介

当前COVID-19大流行时期,理解SARS-CoV-2(严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2)病毒(可引起COVID-19)的病理学需求,对疫苗和挽救生命疗法的研发是急迫且至关重要的。II型肺泡(ATII)细胞是SARS-CoV-2的主要靶标之一,在肺泡塌陷、导致肺不张、先天免疫应答机制中扮演着重要角色,但它却是难以分离和研究的细胞类型之一。这部分归因于ATII细胞在培养中倾向于分化为ATI细胞,以及它们对于初次分离的成纤维细胞污染的敏感。已公开发表的成功分离ATII细胞案例均需要高度专业的科学家与设备,这增加了细胞分析改进的复杂性、成本及时间,从而延迟了药物开发的速度。这是LeviCell™可以做出贡献的地方。

方法

为了满足高存活力的敏感及困难细胞类型(例如ATII细胞)的分离的需求,LevitasBio, Inc.开发了LeviCell™平台 - 一种功能强大,无标记的细胞分选平台,可轻柔、快速、高效地分离和富集细胞。凭借其创新的液相磁悬浮芯片技术,利用细胞的固有密度和磁特征差异,LeviCell™从三个方面改进了当前的细胞分离方法。

Advantage 1

LeviCell™不使用标记即可处理细胞,使用标记会激活敏感的细胞类型,例如巨噬细胞、脂肪细胞、心肌细胞和ATII细胞。

Advantage 2

LeviCell™的处理过程快速、简便且可靠,它提供了一种可重现的细胞分离方法,而不需要昂贵且复杂的工作流程。

Advantage 3

LeviCell™可以处理任何起始细胞数量的典型与难分离的细胞类型,具有其他现行技术不具备的广泛的适用性。

这些特性使得LeviCell™可成为一种理想的技术,可快速有效地解决高效且一致性地分离原代ATII细胞的技术挑战,同时从人类样品获得高活力细胞,用以COVID-19治疗研究和开发的紧急用途。

上样 - 悬浮 - 收集

Step 1

上样

将样品吸移到LeviCell™芯片中

Step 2

自动无标记排序

精确的密度梯度可根据细胞的物理性质来驱动悬浮

Step 3

样品采集

选定的种群被收集到单独的收集孔中,以供进一步分析或使用

结果

健康的人体肺部样品被HTII-280 (一种对ATII细胞顶端表面膜蛋白特异的单克隆抗体)标记,以在LeviCell™平台中悬浮时帮助识别它们。下图展示了使用明场和荧光显微镜将HTII-280标记的ATII细胞引入LeviCell™中。大多数的ATII细胞悬浮在参考线上方,表明具有强大的生存能力。参考线下方的细胞则可能已经死亡、濒临死亡或代表不同的ATII细胞亚型。

LeviCell™平台中的ATII细胞分离的明场(左)和荧光(右)显微镜影像。ATII细胞用HTII-280标记,以在分离通道中被可视化。参考线指示下游样品分离器所处的液位。细胞被分离器分离并流向不同的出口:活细胞(顶部)和细胞碎片/死细胞(底部)。

平衡后,顶部和底部条带(分别位于参考线上方和下方)通过两个不同的出口被洗脱分开,并在下图中成像。细胞用DAPI、抗KRT5抗体和先前应用的抗HTII-280抗体染色,以便于识别和评估富集效果。DAPI结合DNA的AT富集区域,指示细胞核的位置,而KRT5是肺基底细胞的标志物。

经LeviCell™分离后的细胞影像。顶部条带(顶图)显示富集了用HTII-280染成红色的ATII细胞的样品,底部条带(底图)显示了样品中存在的残留细胞。分离细胞的影像显示,与从底部条带收集的样本相比,通过消除了大量的I型肺泡细胞和其他细胞,顶部条带中的ATII细胞富集效果显著。这些数据有力地支持了LeviCell™平台提供优化方案的能力,以分离和富集高度活性且适合培养的ATII细胞。

结论

LeviCell™平台已经证明了许多细胞系的分离能力,包括高度敏感的细胞类型(例如ATII细胞),这些细胞类型无法轻易使用常规方法分离。当前的主流技术依赖于标记,这经常引起诸如降低敏感细胞类型的活力;不适合培养的分离物纯度;大量初始细胞群需求;高细胞死亡率;意外改造;以及分离过程中产生潜在的气溶胶等问题。尤其对于SARS-CoV-2来说,因为病毒颗粒的气溶胶化造成科学家更容易感染病毒。LeviCell™提供了一种经济高效、简单、省时、易复制且无气溶胶的方法,可从人体组织中分离感染和未感染的ATII细胞的,且不会牺牲活性、富集或试验的完整性。LeviCell™在实验室的应用,将加速COVID-19疗法的开发,并支持更广泛的SARS-CoV-2研究工作。

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