简介
在应对难以处理的组织和样本时，细胞核已迅速成为单细胞研究和开发的主要目标之一。虽然处理细胞应该比处理细胞核更简单直接，但实际上处理组织往往比预期的要更复杂和困难。
在处理时，组织的细胞组成、细胞外基质和解离性质各不相同。因此，研究人员发现越来越难以建立经过充分验证和统一的解离与纯化方案，以获得可靠、高质量的单细胞悬液。作为替代方案，细胞核工作流程不仅为单细胞分析提供了更加统一和标准化的起始材料，而且还消除了与组织解离和处理相关的潜在基因表达变化，从而克服了上述的诸多挑战。
遗憾的是，细胞核制备也有其自身的困难。特别是如何从死细胞和碎片中提取纯化细胞核。传统方法仍然难以操作且耗时，导致产量和纯度欠佳。
LeviCell™提供了一种快速、简便且高效的细胞核纯化方法。
方法
将快速冷冻的肺、脑组织与细胞核裂解缓冲液共同冰浴 30 分钟，然后分离细胞核。用含有0.1% BSA的PBS清洗细胞核两次，然后重悬于细胞核储存缓冲液（1 M蔗糖 + 若干物质）。将3e5个细胞核重悬于100mM悬浮缓冲液中，从而制备用于富集的细胞核。将一份样品放置于一旁，以在富集后用于比较。细胞核在LeviCell™的30分钟平衡时间中完成富集。用PI对产物染色并使用Echo显微镜成像。
Step 1
上样
将样品吸移到LeviCell™芯片中
Step 2
自动无标记排序
精确的密度梯度可根据细胞的物理性质来驱动悬浮
Step 3
样品采集
选定的种群被收集到单独的收集孔中，以供进一步分析或使用
结果
PI会将细胞核染为亮色，但细胞碎片不会染色。经过染色的起始样品和LeviCell™产物图像表明，两种组织样本中未染色碎片数量均显著减少。肺组织产生的碎片比脑组织多（下图A和C），但在使用LeviCell™富集后，两个样本的碎片均显著减少（下图B和D）。
为进行定量分析，将富集前与富集后的细胞核样本用PI染色，并通过细胞核与碎片进行计数分析。PI不会被染色碎片，便于识别。
下图所示为分离的肺样本和Jurkat样本，并对LeviCell™富集的结果进行人工评分和报告。对于肺样本，纯度平均提高了2倍，从约40%上升至 80%；Jurkat样本起始纯度较高，约80%，产出纯度提高15%至约95%。
结论
LeviCell™平台经证明能够在温和、无标记、封闭环境中进行高效细胞核富集，显示了该平台为细胞核分离提供可行解决方案的巨大潜力。
