简介
作为样品制备中最重要的步骤之一，处理组织样品（例如切除和组织活检）也是最具挑战性的。由于这些样本通常用于诊断和研究目的，因此在确保目标细胞富集的同时，保持原始样本的细胞种群代表比例也至关重要。
另外，由于富集和碎片去除过程涉及多个复杂步骤，包括将敏感细胞暴露于苛刻的物理和化学条件下，因此低活力和低产量是常见的结果。这些挑战使许多科学家和研究人员感到沮丧。
LeviCell™的开创性悬浮技术已被证明可以有效去除死细胞和碎片，同时从各种组织中产生更高的脆弱细胞类型的产量和活力，并且不会导致基因表达谱的改变。LeviCell™平台可从组织中温和地选择活细胞，而无需细胞表面标记物或抗体，因为这些方法常会导致偏向性选择、细胞活化与细胞损伤。
方法
将冷冻的解离肿瘤细胞（DTC）小瓶在37°C的水浴中解冻。在小瓶中残留少量冰的情况下，将解冻的细胞逐滴转移至10 mL温热的培养基+ 10％FBS中。500 rcf离心细胞5分钟。去除上清液，并将沉淀重悬于10mL的温热培养基中。通过1：1稀释的台盼蓝染色确定细胞计数和活力。
Step 1
上样
将样品吸移到LeviCell™芯片中
Step 2
自动无标记排序
精确的密度梯度可根据细胞的物理性质来驱动悬浮
Step 3
样品采集
选定的种群被收集到单独的收集孔中，以供进一步分析或使用
结果
下图比较了基于磁珠富集和LeviCell™平台的膀胱肿瘤、结直肠癌和肾细胞癌细胞的起始（蓝色）和最终（绿色）活性。LeviCell™富集不同细胞类型的卓越技术能力在结果中是显而易见的。
LeviCell™产量差异
与常用的基于磁珠的富集技术相比，LeviCell™显示出显著的更高的活性产率。
无与伦比的碎片去除能力
这些图像清楚地表明，pre-LeviCell™类别中的原始碎片已被去除，并且不存在于发现的活细胞的通道（上）图像中。通道（下）图像包含所有碎片。
在LeviCell™上测试过的组织类型列表：
使用LeviCell™富集非小细胞肺癌（NSCLC）的活性，从初始的58％到了最终的79％（A）。通道（上）输出（红色框）显示了CD45 +淋巴细胞群中CD45 +以及CD3 +、CD19 +和CD11b +细胞数量与分选前的数量（蓝色条）（B）相似。所有细胞类型的稳定活细胞产量的一致性证实了LeviCell™平台的快速、温和和强大的分离技术如何能够保留原始种群的表征。
结论
LeviCell™的创新性悬浮技术平台使用不到1 psi的压力，实现了完全无接触、无标记的3步轻柔分选过程，仅需20分钟即可完成。该系统确实是一种简单、快速且可靠的方法，可用于处理复杂的和传统上难以处理的解离肿瘤样本，以进行活细胞富集和碎片去除。然后，富集的样本可用于各种下游应用，例如NGS，单细胞分析和化合物测试。
